Técnicas de Ácidos Nucleicos Recombinantes en la Hidatidosis quística (Enfermedad por Echinococcus granulosus)

 En la naturaleza

El echinococus posee las subunidades recombinantes AgB8 / 1 y AgB8 / 2, han demostrado ser valiosos para el diagnóstico de EC, son mejores que otros métodos ya que parecen producir una mejor especificidad con poca o ninguna pérdida de sensibilidad. Los productos proteicos maduros de estos genes son pequeños (alrededor de 8 kDa en masa), además llegan a presentar polipéptidos secretados ricos en hélice α, con capacidad de autoensamblaje generando oligómeros de alta masa molecular. (1)

Artificial

La vacuna de proteína recombinante, EG95, se ha utilizado con éxito en ensayos de vacuna de oveja contra CE en varios países. En este estudio, expresamos el antígeno modificado, EG95NC-GST, Los resultados demuestran que los medios SOC y TB proporcionaron altos rendimientos en densidad celular y expresión de proteína EG95. También se realizó la purificación de la proteína recombinante con cromatografía de afinidad (usando FPLC) para aumentar la pureza del EG95NC. (2)

Adn Recombinante
Fuente: Khan Academy

T: Vacunación contra la hidatidosis: Clonación molecular y expresión óptima del EG95NC- Antígeno recombinante en Escherichia coli.
O: Clonación molecular y expresión óptima del EG95NC- Antígeno recombinante en Escherichia coli.
G: EG95NC 
ER: XhoI 
EL: Ligasa T4
V: Plásmido pGEX (GE Healthcare)
CR: Procariota E. Coli Top10F
MTG: Transformación por Conjugación Bacteriana
MIC:  Cultivo con medio de caldo Luria (LB) y SDS-PAGE 

Bibliografía:

1. Folle AM, Kitano ES, Lima A, Gil M, Cucher M, Mourglia-Ettlin G, et al. Characterisation of Antigen B Protein Species Present in the Hydatid Cyst Fluid of Echinococcus canadensis G7 Genotype. PLoS Negl Trop Dis [Internet]. 3 de enero de 2017 [citado 2 de agosto de 2021];11(1):e0005250. Disponible en: https://journals.plos.org/plosntds/article?id=10.1371/journal.pntd.0005250

2. M J, M L, CG G, K T, A B, MM E, et al. Vaccination Against Hydatidosis: Molecular Cloning and Optimal Expression of the EG95NC - Recombinant Antigen in Escherichia coli. Protein J [Internet]. 1 de diciembre de 2017 [citado 26 de julio de 2021];36(6):472–7. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29139018/

Técnica de Hibridación en Pancreatitis Aguda

La Hibridación in situ de fluorescencia basada en imágenes de localización de fluctuación (fliFISH), ha demostrado ser una técnica muy útil para una detección y recuento precisos de copias de ARN en células individuales.  Con fliFISH multicolor, vemos patrones de expresión génica radial en islotes pancreáticos de ratón para la insulina, el factor de transcripción, NKX2-2 y su relación (Nkx2-2 / Ins2). Dando valores más altos en las células β en el núcleo y menor en la periferia, (en diabéticos). Sienta las bases para una transcriptómica unicelular confiable. (1)

Hibridación in situ
Fuente: Sysmex

Bibliografía:

1. Y C, D H, LM M, WB C, MJ G, C A, et al. Fluctuation localization imaging-based fluorescence in situ hybridization (fliFISH) for accurate detection and counting of RNA copies in single cells. Nucleic Acids Res [Internet]. 25 de enero de 2018 [citado 18 de julio de 2021];46(2). Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29040675/

Prueba PCR en Pancreatitis Aguda

T: Las alteraciones en la expresión de varios microARN (miARN) ocurren en el tumor de PDAC y en lesiones preneoplásicas como la llamada neoplasia mucinosa papilar intraductal (IPMN)
O: Identificar qué miARN están alterados en biopsias líquidas de pacientes con PDAC e IPMN para encontrar nuevos biomarcadores no invasivos para una detección temprana.
M: 10 ml de sangre venosa periférica en anticoagulante estéril tratado con ácido etilendiaminotetraacético (K2EDTA)
AN: microARN (miARN) 
G: miR21-5p, miR-33a-3p, miR-320a, and miR-93-5p y CA19.9
PCR: PCR de transcripción inversa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR)
V:  EFO

PCR
Fuente: Redacción Médica

Bibliografía:

1. Vila-Navarro E, Duran-Sanchon S, Vila-Casadesús M, Moreira L, Gins A, Cuatrecasas M, et al. Nuevas firmas de miARN circulantes para la detección temprana de neoplasias pancreáticas. Clin Transl Gastroenterol [Internet]. 2019;10(4):1–9. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31009404/

Alteraciones de la Epigenómica en la Pancreatitis Aguda

En el curso de la pancreatitis se ha detectado varias modificaciones, como lo son: que las actividades de las serín/treonín proteín fosfatasas PP2A, PP2B y PP2C en la PA (1 h post-inducción) disminuyeron en un 50%, 57% y 29%, respectivamente, respecto a los controles. La pentoxifilina previene la inducción de genes de respuesta temprana (egr-1, atf-3) y tardía (inos, icam, il-6, tnf-alpha), y el reclutamiento de las histonas acetiltransferasas a sus promotores génicos, así como el reclutamiento de factores de transcripción (NF-kB y C/BPbeta), todo esto como parte de la epigenómica (1).

Genes pancreatitis
Fuente: Info.Farmacia

1. Escobar J, Sandoval J, Pereda J, Sacilotto N, Rodríguez JL, Sabater L, et al. ACTIVIDAD DE LA SER/THR FOSFATASA PP2A Y REGULACIÓN EPIGENÉTICA DE GENES PRO-INFLAMATORIOS EN LA PANCREATITIS AGUDA. Gastroenterol Hepatol [Internet]. 1 de marzo de 2009 [citado 4 de julio de 2021];32(3):181. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0210570509000946

Alteraciones de la traducción en la Pancreatitis Aguda

 La pancreratitis causada por la infección del virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV),  En un experimento de infección de células CHSE/F se observó una disminución de la traducción CAP dependiente y un aumento de la traducción IRES dependiente. Las proteínas virales VP1, pVP2, VP2 y VP4 en la traducción de los mRNAs reporteros cuya traducción fuera dependiente de CAP o del sitio interno de entrada al ribosoma (IRES). Para ello se evaluó la expresión de reporteros bicistrónicos (dual luc o dL) que contienen los IRES del virus de la parálisis de Cricket (CrPV) y del virus de la hepatitis C (HCV)(1).

Traducción del ADN 
Fuente: Instituto Nacional del Cáncer

1. Cárcamo Cárcamo FAB. “Efecto de la infección del Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa (IPNV) en la traducción de los mRNAs de su célula hospedero CHSE/F” FERNANDA AYESHA BELÉN CÁRCAMO CÁRCAMO [Internet]. 2018 [citado 27 de junio de 2021]. Disponible en: http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/150613

Alteraciones en la Transcripción en la Pancreatitis Aguda

 No se han encontrado errores en la transcripción que se los relacione con la pancreatitis. Pero existen un número de genes que pueden conllevar a patologías del páncreas al existir errores en la transcripción.

- Cuando hay aumento en la transcripción. el gen HER-2/neu ve sobreexpresado y puede desarrollar metástasis y la mayor sobrevida celular

-SMAD4/DPC4: Este gen codifica una proteína que participa en la transcripción génica. En su inactivación pueden ocurrir neoplasias no ductales o tumores malignos extrapancreáticos (1).

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  Alteraciones en la transcripción
  Fuente: Instituto Nacional del Cáncer

1. Nadal Navajas Á. ALTERACIONES FUNCIONALES EN LA CÉLULA β PANCREÁTICA DEBIDAS A LA EXPOSICIÓN PERSISTENTE A DOSIS MEDIOAMBIENTALMENTE RELEVANTES DE BISFENOL-A Memoria presentada por Sabrina Villar Pazos Para optar al grado de doctor Dirigida por [Internet]. Elche - España; 2017 [citado 19 de junio de 2021]. Disponible en:  http://193.147.134.18/bitstream/11000/4960/1/Tesis%20Doctoral%20Villar%20Pazos%2C%20Sabrina.pdf

Alteraciones de la replicación o alteraciones de la genómica de la Pancreatitis Aguda

Se han descrito diversas alteraciones genéticas entre ellas destacan:

• Las del gen del tripsinógeno catiónico (PRSS1) porque incrementan la activación del tripsinógeno o previenen la inactivación de la tripsina dentro del acino ocasionando la autodigestión pancreática. 
• La del gen inhibidor de la tripsina secretora pancreática (SPINK1). En condiciones normales, este inhibidor actúa como la primera línea de defensa contra la activación prematura del tripsinógeno; sin embargo, debe destacarse que su efecto es tan solo para 20% de la tripsina potencial.

Se ha sugerido que las mutaciones de este gen por sí mismas no causan pancreatitis (1).

Alteración Genética
Fuente: RH Salud y Bienestar

Bibliografía

1. Marik PE, Zaloga GP. Meta-analysis of parenteral-nutrition versus enteral nutrition in patients with acute pancreatitis. Br Med J [Internet]. 12 de junio de 2012 [citado 11 de junio de 2021];328(7453):1407–10. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1665-11462012000100002